胱天蛋白酶的活化在細胞凋亡中發(fā)揮著(zhù)主要作用。FITC-C6-DEVD-FMK提供了在活細胞中靈敏檢測活化的胱天蛋白酶-3的方便手段。FITC-DEVD-FMK是細胞滲透性的，無(wú)毒的，并且不可逆地結合到活化的胱天蛋白酶-3在細胞凋亡。在FITC標記的可用于直接檢測活化的胱天蛋白酶的凋亡細胞可通過(guò)熒光顯微鏡，流式細胞儀，或熒光板讀數器進(jìn)行。

操作方法

以下協(xié)議僅提供指導，應根據您的特定需求進(jìn)行修改。

使用AMC，AFC，pNA，R110和ProRed底物的常規解決方案胱天蛋白酶測定

1.在DMSO中準備10 mM的儲備溶液。

2.如下準備2X半胱天冬酶底物（50 μM）分析溶液：50 μL底物原液，100 μL DTT（1M），400 μL EDTA（100 mM），10 mL Tris Buffer（20 mM），pH = 7.4。

3.將等體積的半胱天冬酶標準品或樣品與2X半胱天冬酶底物測定溶液混合，并在室溫下孵育至少1小時(shí)。

4.使用熒光酶標儀監測熒光，或使用酶標儀監測吸光度。

使用細胞滲透性FMK Caspase探針的細胞Caspase測定

1.在DMSO中準備2-5 mM的儲備溶液。

2.根據需要處理細胞。

3.通過(guò)用20 mM Hepes緩沖液（HHBS）在Hanks中稀釋DMSO儲備溶液（來(lái)自步驟2.1），制備2X滲透性半胱天冬酶底物（20 μM）分析溶液。

4.將等體積的處理過(guò)的細胞與2X半胱天冬酶底物測定溶液混合（來(lái)自步驟2.3），并在37°C，5％CO2的培養箱中孵育細胞至少1小時(shí)。

5.用HHBS清洗細胞至少一次。

6.通過(guò)流式細胞儀，熒光顯微鏡或熒光酶標儀監測熒光強度。

使用細胞滲透性FMK Caspase探針進(jìn)行細胞半胱天冬酶測定（僅適用于＃13470-13476）

1.通過(guò)向小瓶中加入50 μL DMSO制備250X儲備液。

2.根據需要處理細胞。

3.以1：250的比例將250 X DMSO儲備溶液添加到細胞溶液中（例如2 μL至500 μL細胞），并將細胞在37°C，5％CO2的培養箱中孵育1小時(shí)。

4.用HHBS清洗細胞至少一次。

5.通過(guò)流式細胞儀，熒光顯微鏡或熒光酶標儀監測熒光強度。