蛋白酶測定法廣泛用于蛋白酶抑制劑的研究和蛋白酶活性的檢測。監測各種蛋白酶活性已成為許多生物實(shí)驗室的常規任務(wù)。 一些蛋白酶已被確定為良好的藥物開(kāi)發(fā)目標。

 我們的Amplite 通用熒光蛋白酶活性檢測試劑盒是進(jìn)行常規檢測分離蛋白酶或鑒定蛋白質(zhì)樣品中污染蛋白酶的理想選擇。該試劑盒使用熒光酪蛋白偶聯(lián)物，其被證明是廣譜蛋白酶（例如胰蛋白酶，胰凝乳蛋白酶，嗜熱菌蛋白酶，蛋白酶K，蛋白酶XIV和彈性蛋白酶）的通用底物。在完整的底物中，酪蛋白用綠色熒光染料嚴重標記，導致顯著(zhù)的熒光猝滅。蛋白酶催化的水解減輕了其猝滅效應，產(chǎn)生明亮的熒光染料標記的短肽。熒光強度的增加與蛋白酶活性成正比。 該測定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式進(jìn)行，并且易于適應自動(dòng)化。使用FITC濾光片組，可以使用熒光酶標儀在Ex / Em = 490/525 nm下輕松讀取其信號。

操作方法

1.準備工作解決方案：

1.1制備蛋白酶底物溶液：在2X測定緩沖液（組分C）中以1：100稀釋蛋白酶底物（組分A）。在96孔板中每次測定使用50μL蛋白酶底物溶液。

注意：2X分析緩沖液（組分C）設計用于檢測胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶，嗜熱菌蛋白酶，蛋白酶K，蛋白酶XIV和人白細胞彈性蛋白酶的活性。對于其他蛋白酶，請參閱附錄I了解適當的分析緩沖液配方。

1.2胰蛋白酶稀釋?zhuān)涸谌ルx子水中以1:50稀釋胰蛋白酶（5U /μL，組分B），得到濃度為0.1U /μL。

2.根據說(shuō)明書(shū)中的表1和表2，將步驟1中制備的試劑加入96孔微量培養板中。

3.運行酶促反應：

3.1將50μL蛋白酶底物溶液（來(lái)自步驟1.1）加入到測定板中的所有孔中，充分混合試劑。

3.2用Ex / Em = 490 / 525nm的熒光板讀數器監測熒光增加。

對于動(dòng)力學(xué)讀數：立即開(kāi)始連續測量熒光強度，每5分鐘記錄數據30分鐘。

終點(diǎn)讀數：將反應在所需溫度下孵育30至60分鐘，避光，測量熒光強度。